雞脂肪酸合酶(FASN)ELISA試劑盒需自備的設備及試劑：
1. 450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預熱)
2. 單道或多道微量加液器及吸頭
3. 稀釋樣品的EP管
4. 蒸餾水或去離子水
5. 吸水紙
6. 盛放洗液的容器


試劑盒的儲存及有效期：
1.未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。
2.使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。


注意：
試劑盒內(nèi)酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在次實驗后 1個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標簽為準，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。


雞脂肪酸合酶(FASN)ELISA試劑盒操作說明書 本試劑盒標本的采集與保存：
1.血清：
將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。
2.血漿：
用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：
1） 取適量組織塊，于預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；
2） 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行（有條件實驗室可選用機器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融 進一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復凍融法可重復2 次）。
3） 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測。
4. 細胞裂解液：
1）貼壁細胞需要先用胰酶消化，離心收集細胞（懸浮細胞可直接離心收集）；
2）將收集到的細胞用冷PBS 洗3 次；
3）物理方法裂解細胞（可先超聲破碎細胞，再反復凍融）：
i 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂。
ii 反復凍融：將待破碎的細胞在-20 oC 以下冰凍，室溫融解，反復3 次，使細胞溶脹破碎。
4）將標本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘，收集上清備用。
5. 細胞培養(yǎng)上清或其它生物標本：
請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。


注意：
1.以上標本均需密封保存，4oC保存應小于1周，-20oC不應超過1個月，-80oC不應超過2個月。
2.標本使用前應緩慢均衡至室溫，不應加熱使之融解。
3.實驗前紅細胞裂解液必須用標準品稀釋液稀釋。

雞脂肪酸合酶(FASN)ELISA試劑盒操作步驟：
1.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
6.溫育：操作同3。
7.洗滌：操作同5。
8.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
9.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
10.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。


雞脂肪酸合酶(FASN)ELISA試劑盒操作說明書 本試劑盒注意事項：
1.試劑準備：準備一次實驗所需要的酶標條，其它的可從微孔板上拆下，密封，按照說明書要求保存，以備下次使用。
2.加樣：實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。加樣時注意不要有氣泡，將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。加樣或加試劑時，一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。因此，一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi)。推薦設置復孔進行實驗。
3.溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時請將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)，洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài)，同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
4.洗滌：充分的洗滌非常重要，在每次洗滌過程中，都要將洗滌液完全甩干。洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實 驗過程中。
5.反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘觀察一次)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
6.底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7.如果實驗室內(nèi)濕度低于60%，推薦使用加濕器提高濕度水平。


雞脂肪酸合酶(FASN)ELISA檢測試劑盒實驗流程：
1.實驗前標準品、試劑及樣本的準備；
2.加樣（標準品及樣本）50μL，37℃孵育30分鐘；
3.洗板5次，加酶標試劑50ul，37℃孵育半小時；
4.洗板5次；加入顯色液A，B各50ul,37℃孵育顯色15分鐘
5.加終止液50μL，立即450nm讀數(shù)。
6. 計算